发现新的microRNA分子目前的策略可概括为小分子RNA富集纯化、末端修饰及连接已知序列、克隆、测序,并通过分子生物学相关方法确认。
microRNA新基因的预测及注册程序
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研究者根据microRNA的<strong>两个特点</strong>进行预测和验证:
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物种间高度的序列保守性
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microRNA前体呈茎-环结构
</li>
</ul>
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microRNA生物信息学预测基本原理:
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利用已知microRNA前体序列对目标物种的全基因组正反链序列进行同源性扫描
</li>
<li>
获得大量同源性由高到低的候选基因序列
</li>
<li>
筛选这些基因序列(通过各种RNA二级结构分析及预测软件结合动力学分析)
</li>
</ul>
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目前研究者多使用如下软件和网络资源对候选microRNA基因序列进行二级结构分析和新序列筛选:
</p>MiRscan
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<a href="http://genes.mit.edu/mirscan/" target="_blank">MiRscan</a>以已被实验验证的50对线虫pre-microRNA茎-环结构序列数据库为基础,对microRNA序列对进行二级结构分析,并通过评分来判断其为新microRNA的可能性大小。
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MiRscan是较简单的RNA二级结构预测程序,应用范围有一定局限性:只能分析与50对线虫pre-microRNA茎-环结构同源的序列。
</p>RNAfold
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<a href="http://rna.tbi.univie.ac.at/cgi-bin/RNAfold.cgi" target="_blank">RNAfold</a>是RNA研究领域<strong>最常用</strong>的二级结构分析程序,其序列提交长度可达7000bp,还可设置相关动力学系数。
</p>其他microRNA二级结构预测网络资源
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<li>
<a href="http://www.tbi.univie.ac.at/RNA/" target="_blank">Vienna RNA Package</a>
</li>
<li>
<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=dinamelt" target="_blank">the DINAMelt Server</a>
</li>
<li>
<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold" target="_blank">Mfold-3.2</a>
</li>
</ul>新microRNA的注册
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主要在“microRNA Base”网站进行注册。
</p>microRNA新基因的克隆及鉴定方法
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略
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